Microscopía Lightsheet CIB U. Mayor.

La microscopía de fluorescencia de hoja de luz (LSFM) es ideal para la rápida y suave obtención de imágenes de organismos vivos en etapas de desarrollo por tiempos prolongados. Así también, está microscopía es ampliamente utilizada para obtener imágenes en profundidad de tejidos fijados, que sean naturalmente transparentes o previamente clarificados. La obtención rápida de imágenes, con baja fototoxicidad y bajo blanqueamiento de los fluoróforos, es gracias a la iluminación de plano único, (Single Plane Illumination Microscopy, SPIM). En este sistema, la iluminación y la detección se realiza separadamente con objetivos dedicados, en donde la detección es ortogonal a la iluminación de la muestra. Esta configuración óptica entrega un excelente contraste en las imágenes, evitando la fluorescencia fuera de foco típicamente obtenidas con otros sistemas utilizando, a su vez, una baja intensidad de potencia en el láser de excitación, con lo cual protege del daño a la muestra.

Nuestro microscopio ZEISS Lightsheet 7 permite la obtención de imágenes con resolución celular, tanto de muestras vivas y como también grandes especímenes hasta 2 cm. A su vez, este equipo también es compatible con microscopia de expansión, incrementando las posibilidades ópticas de nuestro equipo. Además, para muestras clarificadas, el equipo cuenta con ópticas especializadas, cámaras de inmersión y soportes especiales para muestras, que permiten la adaptación de nuestro sistema para usar variados tipos de muestras, procesadas en diversos protocolos de clarificado que utilicen diferentes Índices de Refracción en sus medios de montaje.

Nuestro sistema esta equipado con las siguientes características:

• Microscopía de iluminación de plano único (SPIM) Microscopio de hoja de luz Zeiss 7, con iluminación dual, pivoteo ultra rápido y dispositivo de posicionamiento de muestra de 4 ejes.
• Dos objetivos de detección 20x con anillo de corrección IR (Plan-APO 20X/0.1 para agua y PN 20X/0.1 Corr nd=1.45 para medios de inmersión y clarity, respectivamente). Un objetivo de detección 5x (EC Plan-NEOFLUAR 5X/0.16) para medio IR 1.33-1.58.
• Dos conjuntos de dos objetivos de iluminación (10X y 5X) con anillo de corrección IR de 1.33 a 1.58.
• 4 canales de excitación láser de estado sólido (405,488, 561, 638).
• 1 filtro bloqueador láser 405/488/561/638
• 3 conjuntos de filtros de emisión dobles: GFP-Cy3, GFP-mCherry, GFP-DRAQ5, Cy3-DRAQ5
• 1 cámara para objetivo de inmersión en agua 20X (IR 1.33); 1 cámara para objetivo de inmersión 20X (IR 1.35-158) y 1 cámara completamente cerrada para objetivos 5X (IR 1.33-1.58)
• 1 módulo para control de temperatura para registro de muestras in vivo